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透析會(huì)產(chǎn)生更多變化的結(jié)果；在我們的實(shí)驗(yàn)室中，嘗試通過(guò)透析將未結(jié)合的金納米粒子與蛋白質(zhì)和抗體結(jié)合物分離，導(dǎo)致金降解，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)大量損失；因此，我們不推薦通過(guò)透析來(lái)分離偶聯(lián)物。
膜離心可能有用，特別是在標(biāo)記非常大的蛋白質(zhì)時(shí)；截留分子量為 50,000 或 100,000 的微量濃縮器將允許 undecagold 和 Nanogold® 穿過(guò)膜。
選擇您的凝膠過(guò)濾介質(zhì)
選擇一種凝膠，它可以最好地分離金結(jié)合物和過(guò)量存在的組分：這將是一種凝膠，其中結(jié)合物的 MW 接近 MW 分級(jí)范圍的頂部，過(guò)量的試劑（無(wú)論是金納米顆粒或未標(biāo)記的較小分子）接近該范圍的底部。注意：如果您擔(dān)心聚集的可能性，請(qǐng)選擇 MW 范圍上限明顯高于金納米粒子偶聯(lián)物 MW 的凝膠。
Nanogold® 標(biāo)記的 Fab' 片段的分離示例如下所示：
所需產(chǎn)物（灰色陰影）與較大的 F(ab') 2綴合物和過(guò)量未結(jié)合的 Nanogold® 分離。要獲得更高的純度，應(yīng)將 12-14 級(jí)分合并并再次分離。
要對(duì)凝膠或印跡進(jìn)行染色以獲得清晰、快速的肉眼結(jié)果：
銀增強(qiáng)方案：
使用 LI Silver 對(duì) Nanogold® 標(biāo)記的分子進(jìn)行凝膠染色
使用GoldEnhance Blots
增強(qiáng) 黃金 在許多情況下，黃金顯影劑優(yōu)于白銀。
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