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抗體或蛋白質標記是指將目標物質（酶、熒光素、生物素）與抗體或其他蛋白質共價連接，并與生成測試物質發(fā)生特異性反應，形成多重復合物。借助熒光顯微鏡、射線測量儀、酶標檢測儀、電子顯微鏡、發(fā)光免疫分析儀等精密儀器，可通過顯微鏡直接觀察檢測結果或在細胞、亞細胞、超微結構、分子水平上自動測定檢測結果。對抗原和抗體反應進行定性和定位研究，或應用各種液相和固相免疫分析方法定性和定量測定體液中的半抗原和抗原。現在，抗體標記技術已廣泛應用于醫(yī)學病理學、免疫組織化學、分子生物學、生物制藥等領域的分析研究和技術測定。常見的抗體標記技術包括酶標記、生物素化標記和熒光素標記。
常用的抗體/蛋白質標記技術
酶標記
通過合適的方法將酶與抗體或蛋白質共價鍵合，制成酶標記抗體。然后，通過酶對底物的特異催化作用，生成有色不相容產物或具有一定電子密度的顆粒。這些有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察。也可以用分光光度計來測量。顏色反應表明酶的存在，證明相應的免疫反應已經發(fā)生。
蛋白質-蛋白質綴合通常使用雙功能接頭交聯(lián)劑進行。交聯(lián)劑（NHS酯）的一端與氨基酸賴氨酸和N端的胺（-NH2）反應，另一端（馬來酰亞胺胺）與硫醇基（-SH）反應存在于氨基酸中。然而，SMCC 修飾的蛋白質極其不穩(wěn)定，并且通常會發(fā)生自身反應。
生物素標記
親和素和生物素可以與蛋白質（抗原、抗體、酶）、熒光劑和其他分子結合，而不影響后者的生物活性。是一種理想的標記劑。一個抗體分子可與數十個生物素或親和素分子偶聯(lián)，親和素或生物素分子可與酶或熒光素結合形成生物放大系統(tǒng)，顯著提高檢測的靈敏度。常用的有親和素-生物素標記法、親和素-生物素橋法、親和素-生物素-過氧化物酶復合物法。
熒光標記
染料與蛋白質的結合需要染料與蛋白質之間形成穩(wěn)定的共價鍵，并且這種共價鍵在大多數情況下都不能斷裂。與蛋白質固有的熒光相比，小型有機染料在選擇標記位點和增強熒光方面具有更大的靈活性，已廣泛應用于蛋白質標記。用適當的熒光染料標記后，蛋白質可以在各種生物過程中可視化，以便可以在生化測定中量化或定位在細胞研究中心。染料-蛋白質綴合物已成為研究酶活性、蛋白質相互作用、構象變化以及調節(jié)和觀察特定生物過程的非常重要的工具。它們已廣泛應用于 ELISA、蛋白質印跡、流式細胞術和細胞成像。
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