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免疫熒光是一種免疫染色技術，可使用熒光顯微鏡觀察樣品中的抗原。使用有機溶劑和化學交聯劑仔細固定樣品，以保持其細胞完整性以及亞細胞結構。然后對它們進行透化以進行免疫染色，然后進行封閉以盡量減少非特異性結合。然后用抗體對樣品進行免疫染色，并通過熒光反應使目標顏色可視化。
材料
10X PBS：要制備 1L，將 80g NaCl、2g KCl、2g KH2PO4 和 28.5g NaHPO4 添加到 1L 注射用水中。將 pH 值調整至 7.4。
4% 聚甲醛：要制備 100mL，將 4g 聚甲醛添加到 100mL 1×PBS 中。將 pH 值調整至 7.4。
1×PBS/0.2% Triton X-100(PBS/Triton)：要制備 500mL，將 1mL Triton X-100 添加到 500mL 1× PBS 中。
1×PBS/3% BSA(PBS/BSA)：配制100mL時，將3g BSA加入到100mL 1×PBS中。
協議
準備 固定 透化
在 PBS 中短暫沖洗細胞。
吸出PBS，用4%聚甲醛覆蓋細胞至2-3mm深度約200ul。
讓細胞在室溫下固定 15 分鐘。
吸出固定液，用 PBS 沖洗 3 次，每次 5 分鐘。
吸出PBS，用PBS/Triton在室溫下將細胞覆蓋至2-3mm深度約200ul 5分鐘。
吸出滲透劑在 PBS 中沖洗 3 次，每次 5 分鐘。
免疫染色
將 200ul 用 PBS/BSA 稀釋的一抗輕輕添加到 24 孔板的每孔中。
37℃ 孵育 60 分鐘或 4℃ 過夜。
吸出稀釋的一抗，然后在 PBS 中沖洗 3 次，每次 5 分鐘。
將用 PBS/BSA 稀釋的熒光染料偶聯二抗加入到 24 孔板中，每孔 100ul，室溫避光孵育 30 分鐘。
吸出稀釋的熒光染料偶聯二抗，然后在 PBS 中沖洗 3 次，每次 5 分鐘。
在熒光顯微鏡下測試。
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