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IgASAP Sub1 是一種 IgA1 特異性蛋白酶，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人類 IgA1，產(chǎn)生完整且同質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。
該酶能夠生成完整的單價(jià) Fab 片段以及 IgA1 的中水平分析，從而有助于在疫苗、治療和診斷等開發(fā)過程中進(jìn)行 IgA1 表征。
實(shí)現(xiàn)IgA1 的中層表征和質(zhì)量控制
快速– 在 1 小時(shí)內(nèi)生成均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段
高度特異性– 人類 IgA1 鉸鏈上方有一個(gè)消化位點(diǎn)
為了證明 IgASAP Sub1 的位點(diǎn)特異性，將市售的人骨髓瘤 IgA1 用凍干的 IgASAP Sub1 在 37°C 下消化 1 小時(shí)，并與未消化的 IgA1 進(jìn)行比較。由于 IgA1 攜帶多個(gè) N- 和 O- 聚糖，因此使用 OmniGLYZOR 試劑盒處理樣品，包括在變性條件下使用 PNGaseF 凍干進(jìn)行額外的去糖基化步驟，以去除所有 N-聚糖，以方便數(shù)據(jù)解釋。
使用 IgASAP Sub1 的消化快速、簡單，并且在生理?xiàng)l件下進(jìn)行，酶的特異性可防止 IgA1 的過度消化。盡管起始材料不同，但數(shù)據(jù)清楚地顯示了人 IgA1 上鉸鏈區(qū) (VPSTPP / TPSPST) 的單個(gè)消化位點(diǎn)，并強(qiáng)調(diào)了使用中級工作流程為此類復(fù)雜樣品生成高分辨率質(zhì)量數(shù)據(jù)的優(yōu)勢。
圖 1. IgA1 的位點(diǎn)特異性消化。 a)工作流程示意圖。來自人骨髓瘤的市售 IgA1的 N-和 O-去糖基化b)重鏈 (HC) 以及 N-和 O-去糖基化c) scFc 片段和d) 的解卷積質(zhì)譜使用 IgASAP Sub1 在 37°C 消化 1 小時(shí)后的 Fd 片段。 HC 和 scFc 片段的異質(zhì)性源自多個(gè) C 末端截?cái)嗪褪Ｓ嗟难由?O-聚糖，未被 OmniGLYZOR 去除。通過反相色譜（ACQUITY Premier Protein BEH C4，300 ?，1.7 µm 2.1 x 100 mm，Waters™）分離樣品，并使用 ESI-QTOF MS（Bruker Impact II）進(jìn)行分析。
用于 IgA1 以上鉸鏈消化的凍干酶。
IgASAP Sub1 凍干劑以凍干粉末形式提供，裝在 1000 單位小瓶中，用于消化 1 mg IgA1。
方法開發(fā)的靈活格式
可以組合酶以提高效率
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