celltechgen:免疫測(cè)定試劑和試劑盒描述

更新時(shí)間：2024-03-07 點(diǎn)擊次數(shù)：1022

celltechgen:免疫測(cè)定試劑和試劑盒——用于流式細(xì)胞術(shù)的大鼠 CLCN6 珠基檢測(cè)套裝

貨號(hào)：CTG-BAR1133

試劑盒成分

2 ml 針對(duì)大鼠 CLCN6 的單克隆抗體，R-PE 綴合。

2 ml 抗 R-PE 磁珠。

1 ml 微珠釋放試劑和 1 ml 終止緩沖液

10 毫升稀釋緩沖液。

該試劑盒旨在使用磁珠磁性標(biāo)記來(lái)分離和檢測(cè)大鼠 CLCN6 ⁺細(xì)胞。首先，用與R-PE和抗R-PE磁珠綴合的大鼠CLCN6單克隆抗體標(biāo)記細(xì)胞，在磁力柱上陽(yáng)性選擇大鼠CLCN6 ⁺細(xì)胞，收集用于進(jìn)一步流式細(xì)胞術(shù)分析。磁珠釋放試劑和終止緩沖液可用于將帶有抗體-R-PE 的細(xì)胞從磁珠中釋放出來(lái)。

目標(biāo)特征

符號(hào)：大鼠 CLCN6

基因ID：295586

Uniprot 條目：D4A3H5

蛋白質(zhì)名稱：氯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 6

生物體：褐家鼠（大鼠）

容量

1 X 10 ⁹單元

公式

所有組分均以含有穩(wěn)定劑和 0.05% 疊氮hua鈉的緩沖液形式提供。

儲(chǔ)存與使用

避光保存在 2?8 ^o C 下。不要冷凍。有效期標(biāo)注在小瓶標(biāo)簽上。該產(chǎn)品僅供研究，不可用于診斷程序。

通用協(xié)議

檢測(cè)試劑盒用于分離和檢測(cè)具有特定抗原的靶細(xì)胞。篩選過(guò)程是用針對(duì)特定抗原的單克隆抗體直接對(duì)細(xì)胞進(jìn)行磁性標(biāo)記，并與 R-PE 和 Anti-R-PE 磁珠綴合，然后將標(biāo)記的細(xì)胞保留在磁柱上，然后將目標(biāo)細(xì)胞篩選出來(lái)。被釋放并收集以進(jìn)行進(jìn)一步的流式細(xì)胞術(shù)分析。

1. 樣品制備

當(dāng)使用抗凝外周血或血沉棕黃層時(shí)，應(yīng)通過(guò)密度梯度離心分離外周血單核細(xì)胞 (PBMC)。
^{要在密度梯度分離后去除血小板，請(qǐng)將細(xì)胞沉淀重懸于緩沖液中，并在 20 o} C下以 200 x g 離心 10?15 分鐘。小心吸出上清液。重復(fù)洗滌步驟。
當(dāng)處理組織或溶解的血液時(shí)，使用標(biāo)準(zhǔn)方法制備單細(xì)胞懸浮液。
死細(xì)胞可能會(huì)非特異性地與磁珠結(jié)合。要去除死細(xì)胞，我們建議使用密度梯度離心或死細(xì)胞去除試劑盒。
保持細(xì)胞低溫，并使用預(yù)冷的溶液。

2. 磁性標(biāo)簽

下面給出的磁性標(biāo)記體積最多適用于 10 ⁷個(gè)細(xì)胞。當(dāng)使用少于 10 ^{7 個(gè)}細(xì)胞時(shí)，請(qǐng)使用所示的相同體積。當(dāng)使用更高的細(xì)胞數(shù)量時(shí)，請(qǐng)相應(yīng)地?cái)U(kuò)大所有試劑體積和總體積。
應(yīng)滴定一抗染料偶聯(lián)抗體以確定最佳染色稀釋度。染色不應(yīng)增加陰性群體的熒光強(qiáng)度。

1) 計(jì)算細(xì)胞數(shù)量。

2) 300×g離心細(xì)胞懸液10分鐘。全吸出上清液。

3)每 10 ^{7 個(gè)}總細(xì)胞在 80 µL 緩沖液中重懸細(xì)胞沉淀。

4) 加入 20 µl PE 偶聯(lián)一抗，充分混勻，并在 2?8 ^o C下避光孵育 10 分鐘。

5)每 10 ^{7 個(gè)}細(xì)胞添加 1?2 mL 緩沖液，洗滌細(xì)胞以去除未結(jié)合的一抗，并在 300×g 下離心 10 分鐘。

6)全吸出上清液，并在每 10 ^{7 個(gè)}總細(xì)胞 80 µL 緩沖液中重懸細(xì)胞。

7)每 10 ^{7 個(gè)}總細(xì)胞添加 20 µL 抗 PE 磁珠。

^{8) 充分混合并在 2?8 o} C下孵育 15 分鐘。

^{9) 每10 7 個(gè)}細(xì)胞加入1~2 mL緩沖液洗滌細(xì)胞，300×g離心10分鐘，全吸出上清。

10)在 500 µL 緩沖液中重懸最多 10 ^{7 個(gè)}細(xì)胞。注意：對(duì)于更高的細(xì)胞數(shù)量，請(qǐng)相應(yīng)地增加緩沖液體積。

11) 進(jìn)行磁分離。

3. 檢測(cè)目的細(xì)胞的正選

1) 將色譜柱置于合適的分離器的磁場(chǎng)中。

2) 用適量的緩沖液沖洗來(lái)準(zhǔn)備柱。

3) 將細(xì)胞懸液涂在柱上。

4) 收集通過(guò)的未標(biāo)記細(xì)胞，并用適量緩沖液洗滌柱。執(zhí)行洗滌步驟三次。

5) 從分離器中取出柱并將其放置在合適的收集管上。

6) 將適量的緩沖液移至柱上并釋放靶細(xì)胞以進(jìn)行進(jìn)一步的流式細(xì)胞分析。

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