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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,環保,化工,生物產業,綜合 |
高純總RNA提取試劑盒
本試劑盒是基于特殊優化的裂解液 RNApure 和 RNA 吸附柱的柱式總 RNA 提取試 劑盒，裂解液充分裂解并勻質化樣本，采用*特的硅基質膜吸附技術，通過離心吸附柱 在高鹽狀態下高效專一的結合溶液中的 RNA，同時***限度的有效除去蛋白質、無機鹽 離子及有機雜質等；可從動物組織、植物材料、各種微生物及培養細胞等樣品中快速提 取總 RNA，每次可處理 30-50mg 組織或 5×106細胞，可同時處理多個不同樣品。本試劑 盒提取得到的 RNA可直接應用于 RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等實驗。
自備試劑
氯仿(新開封或提取 RNA 專用)、無水乙醇。
操作步驟
1．各種材料的處理
1）植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎后直接在 RNApure中迅速研磨，每 30-50 mg 組織加入 1ml RNApure，渦旋混勻。注意：樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。
2）動物組織：取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎，每 30-50mg 組織加入 1ml RNApure，勻漿儀進行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入 1ml RNApure 混勻。注意：樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。
3）單層培養細胞：吸去培養液，可直接在培養板中加入適量 RNApure（每 10cm2面積需要 1ml RNApure），用取樣器反復吹打使細胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后，將細胞溶液轉移至 Rnase-free 的離心管中，13000×g 離心 5 分鐘，收集細胞沉淀，仔細吸除所有上清，加入 1ml RNApure 混勻。
注意：
a. 收集細胞數量不要超過 1×10?。
b. RNApure 加量根據培養板面積決定，不是由細胞數決定。如果 RNApure 加量不足，可能導致提取的 RNA 中有 DNA 污染。
c. 收集細胞時一定要將細胞培養液去除干凈，否則會導致裂解不全，造成 RNA 的產量降低。
4）細胞懸液：離心收集細胞。每 5×10?-1×10?動物、植物和酵母細胞或每 10?細菌細胞加入 1 ml RNApure。
注意：
a. 加入 RNApure 前不要洗滌細胞，以免 RNA 降解。
b. 一些酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理。
5）血液處理：直接取新鮮的血液，加入 3 倍體積 RNApure（推薦 0.25ml 全血加入 0.75mlRNApure），充分振蕩混勻。
6）可選步驟：對于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質含量高的樣品，如肌肉組織、脂肪組
規格 100 次
適用范圍:
RNA 提取
試劑盒組分：
RNApure Reagent 100ml
Buffer RW1 40ml*2
Buffer RW2 11ml*2
Rnase-free Water 10ml
Rnase-free吸附柱RB 50個*2
保存條件：
RNApure Reagent 4°C
其它組分 室溫
RNA 純化組織或植物的塊莖，可以在勻漿處理后 13,000×g 離心 10 分鐘以除去不溶物質，此時沉淀中含胞外物質、多糖和高分子量的 DNA，而 RNA 存在于上清中。
2．樣品中加入 RNApure 后反復吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置 5 分鐘，使蛋白核酸復合物全分離。
3．以每 1ml RNApure 加入 200ul 氯仿的比例加入氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩 15 秒，室溫放置 2 分鐘。
4．13,000×g 離心 10 分鐘，此時樣品分為三層：有機相，中間層和上層無色水相，RNA主要在上層水相中，將上層水相移到一個新的 Rnase-free 離心管（自備）中。
5．在得到的水相溶液中加入 0.5 倍無水乙醇，顛倒混勻。
6．將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱 RB 中。若一次不能加完溶液，可分多次轉入。13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入 700ul Buffer RW1，13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
8．向吸附柱中加入 500ul Buffer RW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），13,000×g 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
9．重復步驟 8。
10．13,000×g 離心 2 分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，晾干。
注意：這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇殘留會影響后續酶促反應（酶切、PCR 等）。
11．將吸附柱置于一個新的 Rnase-free 離心管（自備）中，向吸附柱的中間部位加入30-50ul Rnase-free Water，室溫放置 1 分鐘，13,000×g 離心 1 分鐘，收集 RNA 溶液，-70℃保存 RNA，防止降解。
注意：1）Rnase-free Wate 體積不應小于 30ul，體積過小影響回收率。
2）如果要提高 RNA 的產量，可用 30-50ul 新的 Rnase-free Water 重復步驟 11。
3）如果要提高 RNA 濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復步驟 11。
上海牧榮生物科技有限公司
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